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細(xì)胞遷移步驟實(shí)驗(yàn)方法
點(diǎn)擊次數(shù):1917 更新時(shí)間:2022-09-13

    細(xì)胞遷移即細(xì)胞劃痕法,是測(cè)定細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)與修復(fù)能力的方法,類似體外傷口愈合模型。在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上,用微量槍頭或其他硬物在細(xì)胞生長(zhǎng)的中央?yún)^(qū)域劃線,去除中央部分的細(xì)胞,然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時(shí)間,取出細(xì)胞培養(yǎng)板,觀察周邊細(xì)胞是否生長(zhǎng)至中央劃痕區(qū),以此判斷細(xì)胞的生長(zhǎng)遷移能力,實(shí)驗(yàn)通常需設(shè)定正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等組別,通過不同分組之間的細(xì)胞對(duì)于劃痕區(qū)的修復(fù)能力,可以判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力。

   當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到融合成單層狀態(tài)時(shí),在融合的單層細(xì)胞上人為一個(gè)空白區(qū)域,稱為“劃痕"。劃痕邊緣的細(xì)胞會(huì)逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕"愈合。

 實(shí)驗(yàn)方法:

1、培養(yǎng)板接種細(xì)胞之前先用marker筆在12孔板背面畫橫線標(biāo)記(方便拍照時(shí)定位同一個(gè)視野)。

2、細(xì)胞消化后接入12孔板,數(shù)量以貼壁后鋪滿板底為宜(數(shù)量少時(shí)可培養(yǎng)一段時(shí)間至鋪滿板底)。

3、細(xì)胞鋪滿板底后,用1ml槍頭垂直于孔板細(xì)胞劃痕,盡量保證各個(gè)劃痕寬度一致。(人工槍頭劃痕難以保證劃痕寬度的一致性,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,這也是該方法最大的缺陷)。

4、吸去細(xì)胞培養(yǎng)液,用PBS沖洗孔板三次,洗去劃痕產(chǎn)生的細(xì)胞碎片。

5、加入無血清培養(yǎng)基,拍照記錄。

6、將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱培養(yǎng),每隔4-6小時(shí)取出拍照。

7、根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

 

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